Пояснения о клинических исследованиях Спутника-М

Согласно официальной инструкции, утвержденной Минздравом РФ, Гам-КОВИД-Вак (торговое название «Спутник V») представляет собой двухкомпонентный препарат, действующим веществом которого являются: рекомбинантные аденовирусные частицы, содержащие ген белка S вируса SARS-CoV-2, в количестве (1,0±0,5)*10^11 частиц/доза. Для первого компонента использован серотип аденовируса 26, для второго - 5.
Защитный титр антител в настоящее время неизвестен. Продолжительность защиты неизвестна. Клинические исследования по изучению эпидемиологической эффективности продолжаются в настоящее время [Нормативная документация ЛП-006395-110820,
«Спутник М»: двухкомпонентный препарат, полностью повторяет состав Спутник V, включая вспомогательные вещества, соответственно по первому и второму компоненту, за исключением того, что концентрация рекомбинантных аденовирусных частицы, содержащих ген белка S вируса SARS-CoV-2 снижена в 5 раз, т.е. содержит (2,0±1,5) *10^10 частиц/доза. Предназначен для подростков от 12 до 17 лет включительно. Защитный титр антител в настоящее время неизвестен. Продолжительность защиты неизвестна. Регистрационный номер: ЛП-007632-241121 [http://sc30lipetsk.ru/data/documents/LP-0076322021_.pdf].

Уже только одни эти официальные инструкции указывают на сомнительный профиль польза\риск.

«Защитный титр антител в настоящее время неизвестен». Эта фраза означает, что разработчики не могут ответить на вопрос, какое количество антител необходимо организму, чтобы защититься от заражения новой коронавирусной инфекцией.

«Продолжительность защиты не известна». Подобное заявление и вовсе заставляет сомневаться в эффективности этих иммунопрофилактических препаратов.

«Клинические исследования по изучению эпидемиологической эффективности продолжаются в настоящее время» - указывает на незавершенность клинических испытаний.

Наибольший страх среди вакцинологов вызывает вероятность создания вакцины, которая не только неэффективна, но ещё и усугубляет заболевание. К сожалению, это часто наблюдается в случае вакцин против коронавирусных инфекций, которые разрабатываются, начиная с 70-х гг.

Основная проблема для создания эффективных и безопасных вакцин против коронавирусных инфекций это эффект антитело зависимого усиления инфекции.
Антитело зависимое усиление (ADE) — это явление, при котором уже существующие плохо нейтрализующие антитела в крови человека или животного приводят к усилению инфекции, заражению которой он подвергся.

Научный портал PubMed (National Library of Medicine, National Centr for Biotechnology Information) по запросы antibody-dependent enhancement (антитело зависимое усиление) в настоящее время выдает 3060 публикаций Антителозависимое усиление наблюдается при заражении: различными штаммами коронавирусов, вирусом Эбола, вирусом Зика (Денге), RSV (респираторно-синцитиальный вирус человека) и некоторыми штаммами гриппа (H1N1, H2N2, H3N2 и др.) [1 - 8].

Механизмы антитело зависимого усиления инфекции до конца не изучены. Проблемы, связанные с этим эффектом и новым заболеванием, условно можно разделить на два типа:
1) усиление проникновения вируса внутрь клетки и его репликации;
2) образование иммунных комплексов, вызывающих усиленное воспаление (цитокиновый шторм) и иммунопатологии (аутоиммунные реакции Th2-типа) [9].
Ни Спутник V, ни Спутник Лайт, ни Спутник М не были протестированы на наличие или отсутствие у этих препаратов эффекта антитело зависимого усиления инфекции. Чтобы проверить этот эффект, подопытных животных после вакцинации и выработки в их организме антител следовало заразить вирусом SARS-CoV-2, так же как и контрольную (не получившую вакцинацию) группу животных. Именно такой эксперимент позволяет определить либо эффективность вакцины в защите от заражения, либо её патогенный характер и вакцинозависимое усиление заболевания.

На примерах вакцин против других штаммов коронавируса, MERS и SARS-CoV, из экспериментальных данных, опубликованных в научных рецензируемых журналах, известно, что именно антитела к S-белкам отвечают за возникновение эффекта антитело зависимого усиления. Именно этот эффект может быть связан с клиническим наблюдением повышенной степени тяжести симптомов COVID-19. Клинические свидетельства раннего высокого уровня IgG у пациентов с SARS коррелирует с прогрессированием и тяжестью заболевания [10 - 20].

Таким образом, разработчикам вакцин следовало не просто провести исследование на наличие или отсутствие эффекта антитело зависимого усиления у их вакцин, но и дать научное обоснование, каким именно образом им удалось обойти такую сложную проблему.

В противном случае мы наблюдаем нарушение прав наших граждан на получение качественных, эффективных и безопасных препаратов: 18 ст. 323-ФЗ и 4 ст. 157-ФЗ.

Спутник V, Лайт и М представляют собой векторные вакцины.
Векторные вакцины — это препараты, полученные с помощью генной инженерии, т.е. представляют собой ГМО продукты. В этой связи хочется отметить, что для России и Евразийского экономического союза маркировка ГМО продуктов является обязательной (КоАП РФ ст. 14.46.1, http://www.consultant.ru/law/hotdocs/63230.html/). И хотя эти требования распространяются на пищевую продукцию, достаточно странно, что такая маркировка отсутствует на препаратах, предназначенных для прямого введения в организм человека в виде инъекций.

Проникая внутрь клетки, вирусная вакцина вызывает экспрессию патогенных белков, провоцируя, таким образом, иммунный ответ.
Спутник V, Лайт и М созданы на основе аденовирусов.
Аденовирусы — семейство ДНК-содержащих вирусов без липопротеиновой оболочки. Аденовирусы приводят к инфекционным заболеваниям верхних дыхательных путей. Однако серотипы 5 и 26, которые были использованы для производства Спутник V, не опасны для человека.
Аденовирусные векторы также широко используются как средства доставки в экспериментах по геномному редактированию. Генно-модифицированные аденовирусы сами по себе могут вызывать и тяжелые воспалительные реакции, и иммунные патологии.
Геномное редактирование с использованием аденовирусных векторов разрабатывалось и тестировалось для лечения различных генетических заболеваний, а также для терапии рака. Схематическая структура этих препаратов совпадает с современными иммунопрофилактическими препаратами против новой коронавирусной инфекции, такими как Спутник V, Лайт и М, один в один. Для их создания используют аденовирусные транспортеры (с делециями или без) и экспрессионные кассеты, которые обычно состоят из промоутера цитомегаловируса и трансгена. Основное значимое различие только в транспортируемом трансгене. Кроме того, в настоящее время уже есть данные, указывающие на то, что использование подобных вакцин ведет к нарушению репарации человеческой ДНК, т.е. к нарушению способности к самовосстановлению [21-29].

Препараты, предназначенные для геномного редактирования или генной терапии, это принципиально новый класс препаратов, не испытанный прежде массово на людях. Любые угрозы вторжения в работу генетического аппарата человека это очень высокий и не оправданный риск.
Специальные исследования по влиянию на геном человека или млекопитающих Спутника V, Лайт и М проведены не были. Не был изучен вопрос, происходит ли интеграция искусственно созданного гена S-белка в геном человека, или он просто находится внутри ядра рядом с человеческими хромосомами? Происходит ли деградация этого гена, или он навсегда остается внутри генетического аппарата человека? Как долго этот ген экспрессирует внутри человеческих клеток? Существует ли тканеспецифичность? Что будет с клетками человеческого организма, производящими биосинтез S-белков, после выработки антител к S-белкам, если по законам иммунологии и по логике вещей иммунная система должна атаковать такие клетки? В настоящий момент эти и многие другие вопросы остаются без ответа.

Таким образом наши граждане и законные представители несовершеннолетних детей не информируются об угрозе вторжения в работу генетического аппарата человека, что нарушает 157 и 323 ФЗ. Также следует отметить, что полная нуклеотидная последовательность измененных аденовирусных частиц в составе Спутников прикрыта патентами, что также нарушает принцип информированного добровольного согласия.

Аденовирусные препараты, аналогичные по дизайну Спутнику V, Лайт и М, помимо использования их как транспортеров для переноса трансгенов в экспериментах по геномному редактированию, широко разрабатывались и применялись для лечения онкологических заболеваний. Идея заключается в том, что инфицированные химерным аденовирусом раковые клетки запустят экспрессию трансгенов, и спровоцируют иммунную систему на убийство этих клеток. А расчет на то, что при этом не пострадают здоровые ткани, базируется на том, что аденовирус с дефицитной репликацией может размножаться только в раковых клетках. Репликацию (способность к размножению) аденовируса блокирует белок RB, угнетая фактор транскрипции E2F. Для устранения этой неприятности аденовирус имеет ген E1A, который кодирует белок, связывающий белок RB. Таким образом, делеции в гене E1A, приводят к тому, что производимый белок не может связать белок RB, и репликация в здоровых клетках не запускается. Тогда как в раковых клетках белок RB инактивирован и для запуска репликации аденовируса белок кодируемый геном E1A не нужен [23,30].

Согласно патентам Института им. Гамалеи репликация аденовирусных частиц была подавлена аналогичным образом.
Это очень важный момент, который вызывает опасение, что Спутник V, Лайт или М теоретически может вдруг начать размножаться в организме людей с онкологическими проблемами. На запрос в Институт им. Гамалеи предоставить «Ссылки на документы или научные публикации (либо электронные копии таких документов и публикаций), описывающих клинические исследования на людях с определенными заболеваниями, например, сахарный диабет, сердечно-сосудистые расстройства или онкология» получен следующий ответ: «В настоящее время обособленные клинические исследования с участием групп граждан, страдающих определенными патологиями, не проводились».
Таким образом, вот такой очень серьезный момент разработчиками проверен не был.

Согласно ст.43 п.5 61-ФЗ исследованию на детях должно предшествовать клиническое исследование лекарственного препарата для медицинского применения на совершеннолетних гражданах.
Однако в случае с исследованием Спутника М этого сделано не было.

Ссылки на исследование Спутника V не дают гарантий безопасности препарата Спутник М, поскольку в ходе клинических исследований Спутника V был целый ряд упущений.

Наиболее существенные из них, это отсутствие исследований влияния этих препаратов на репродуктивную функцию человека, а также канцерогенный, мутагенный и тератогенный эффекты.

Для предварительной оценки возможного воздействия на репродуктивную функцию человека стоило провести достаточно простые исследования на группе взрослых добровольцев: для мужчин нужно было проверить спермограмму до и после вакцинации, для женщин – анализ на антимюллеров гормон (маркер овариального резерва у женщин репродуктивного периода) так же до и после вакцинации, чтобы была возможность сравнить результаты. Однако ничего подобного выполнено не было.

Опасения о нарушении работы репродуктивной функции вызывают следующие данные.
Антитела к S-белкам обладают потенциальной способностью перекрестно связываться с человеческим белком синцитином. Белки синцитин 1 и 2 предотвращают отторжение плода на ранних стадиях беременности и способствуют формированию плаценты. Синцитин-1 имеет ретровирус происхождения и немного похож на спайковый белок, экспрессируемый на поверхности SARS-CoV-2, т.е. имеет гомологичные последовательности. Также известно, что заражение матери SARS-CoV-2 может увеличить риск выкидыша, преждевременных родов и мертворождения, что, возможно, связано с повреждением плаценты за счет выработки антител [31,32].

У мужчин в стадии заболевания COVID-19 или после выздоровления в ряде случаев наблюдалось ухудшение качества спермы: уменьшалось количество сперматозоидов, снижалась их подвижность, а также происходила деформация формы. У мужчин, умерших от COVID-19, при вскрытии в семенных канальцах были обнаружены антитела к SARS-CoV-2. Таким образом качество спермы во время заболевания и после выздоровления могло быть ухудшено антителами к коронавирусной инфекции [33 - 40].
Кроме того антитела матери, в том числе и передаваемые младенцу через грудное молоко, могут приводить к мульти системному воспалительному синдрому у детей [41].


Резюме

Применение Спутника М на детях несет следующие угрозы и риски для их жизни и здоровья:

1. Антитело зависимое усиление инфекции: нарушение природной резистентности (устойчивости к патогену), усугубление заболевания в случае заражения вплоть до цитокинового шторма;
2. Вторжение в работу генетического аппарата: обратимые или необратимые изменения, геномное редактирование (интегрированное или нет), препятствие репарации (восстановлению) ДНК;
3. Потенциальная возможность размножения модифицированных аденовирусных частиц в раковых клетках пациентов с диагностированной или недиагностированной онкологией;
4. Потенциальное негативное влияние на репродуктивную функцию.


Используемая литература:

1. Jason A Tetro. Is COVID-19 receiving ADE from other coronaviruses? Microbes Infect. 2020 Mar;22(2):72-73. [PMID: 32092539]
2. Natalia A Kuzmina, Patrick Younan, Pavlo Gilchuk, Rodrigo I Santos, Andrew I Flyak, Philipp A Ilinykh, Kai Huang, Ndongala M Lubaki, Palaniappan Ramanathan, James E Crowe Jr, Alexander Bukreyev. Antibody-Dependent Enhancement of Ebola Virus Infection by Human Antibodies Isolated from Survivors. Cell Rep. 2018 Aug 14;24(7):1802-1815.e5. [PMID: 30110637]
3. Ayato Takada, Heinz Feldmann, Thomas G Ksiazek, Yoshihiro Kawaoka. Antibody-dependent enhancement of Ebola virus infection. J Virol. 2003 Jul;77(13):7539-44. [PMID: 12805454]
4. Rekha Khandia, Ashok Munjal, Kuldeep Dhama, Kumaragurubaran Karthik, Ruchi Tiwari, Yashpal Singh Malik, Raj Kumar Singh, Wanpen Chaicumpa. Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection. Front Immunol. 2018 Apr 23;9:597. [PMID: 29740424]
5. Chien-Te Tseng , Elena Sbrana, Naoko Iwata-Yoshikawa, Patrick C Newman, Tania Garron, Robert L Atmar, Clarence J Peters, Robert B Couch. Immunization With SARS Coronavirus Vaccines Leads to Pulmonary Immunopathology on Challenge With the SARS Virus. PLoS One. 2012;7(4):e35421. doi: 10.1371/journal.pone.0035421. Epub 2012 Apr 20. [PMID: 22536382]
6. Schmidt ME, Knudson CJ, Hartwig SM, Pewe LL, Meyerholz DK, Langlois RA, Harty JT, Varga SM. Memory CD8 T cells mediate severe immunopathology following respiratory syncytial virus infection. PLoS Pathog. 2018 Jan 2;14(1):e1006810. [PMID: 29293660]
7. M Tamura, R G Webster, F A Ennis. Subtype cross-reactive, infection-enhancing antibody responses to influenza A viruses. J Virol. 1994 Jun;68(6):3499-504. [PMID: 8189489]
8. Anjeanette Roberts, Elaine W. Lamirande, Leatrice Vogel, Jadon P. Jackson, Christopher D. Paddock, Jeannette Guarner, Sherif R. Zaki, Timothy Sheahan, Ralph Baric, and Kanta Subbaraoa. Animal models and vaccines for SARS-CoV infection. Virus Res. 2008 Apr; 133(1): 20–32. doi: 10.1016/j.virusres.2007.03.025 [PMID: 17499378]
9. Wen Shi Lee, Adam K Wheatley, Stephen J Kent, Brandon J DeKosky. Antibody-dependent enhancement and SARS-CoV-2 vaccines and therapies. Nat Microbiol. 2020 Oct;5(10):1185-1191. doi: 10.1038/s41564-020-00789-5. Epub 2020 Sep 9.  DOI: 10.1038/s41564-020-00789-5 [PMID: 32908214]
10. Yu D Nechipurenko, A A Anashkina, O V Matveeva. Change of Antigenic Determinants of SARS-CoV-2 Virus S-Protein as a Possible Cause of Antibody-Dependent Enhancement of Virus Infection and Cytokine Storm. Biophysics (Oxf). 2020;65(4):703-709. doi: 10.1134/S0006350920040119. Epub 2020 Oct 19. [PMID: 33100352]
11. Hsueh P-R, Hsiao C-H, Yeh S-H, Wang W-K, Chen P-J, Wang J-T, et al. Microbiologic characteristics, serologic responses, and clinical manifestations in severe acute respiratory syndrome, Taiwan. Emerg Infect Dis. (2003) 9:1163–7. doi: 10.3201/eid0909.030367 [PMID: 14519257]
12. Liu X, Wang J, Xu X, Liao G, Chen Y, Hu C-H. Patterns of IgG and IgM antibody response in COVID-19 patients. Emerg Microbes Infect. (2020) 9:1269–74. doi: 10.1080/22221751.2020.1773324 [PMID: 32515684]
13. Chen W, Zhang J, Qin X, Wang W, Xu M, Wang LF, et al. SARS-CoV-2 neutralizing antibody levels are correlated with severity of COVID-19 pneumonia. Biomed Pharmacother. (2020) 130:110629. doi: 10.1016/j.biopha.2020.110629 [PMID: 33406577]
14. Young BE, Ong SWX, Ng LFP, Anderson DE, Chia WN, Chia PY, et al. Viral dynamics and immune correlates of COVID-19 disease severity. Clin Infect Dis. (2020) 2020:ciaa1280. doi: 10.1093/cid/ciaa1280 [PMID: 32856707]
15. Pujadas E, Chaudhry F, McBride R, Richter F, Zhao S, Wajnberg A, et al. SARSCoV-2 viral load predicts COVID-19 mortality. Lancet Respir Med. (2020) 8:e70. doi: 10.1016/S2213-2600(20)30354-4 [PMID: 32771081]
16. Luo YR, Chakraborty I, Yun C, Wu AHB, Lynch KL. Kinetics of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) antibody avidity maturation and association with disease severity. Clin Infect Dis. (2020). doi: 10.1093/cid/ciaa1389 [PMID: 32927483]
17. Fajnzylber J, Regan J, Coxen K, Corry H, Wong C, Rosenthal A, et al. SARSCoV-2 viral load is associated with increased disease severity and mortality. Nat Commun. 2020 Oct 30;11(1):5493. doi: 10.1038/s41467-020-19057-5 [PMID: 33127906]
18. Darrell O Ricke. Two Different Antibody-Dependent Enhancement (ADE) Risks for SARS-CoV-2 Antibodies. Front Immunol. 2021 Feb 24;12:640093. doi: 10.3389/fimmu.2021.640093. eCollection 2021. [PMID: 33717193]
19. May B. Regeneron Halts Enrollment of Critically Ill Patients in COVID-19 Antibody Trial BioSpace. (2020). Avilable online at: https://www.biospace. (accessed January 28, 2021)
20. Agrawal AS, Tao X, Algaissi A, Garron T, Narayanan K, Peng BH, et al. Immunization with inactivated Middle East Respiratory Syndrome coronavirus vaccine leads to lung immunopathology on challenge with live virus. Hum Vaccin Immunother. (2016) 12:2351–6. doi: 10.1080/21645515.2016.1177688 [PMID: 27269431]
21. Chang Li, Andr; Lieber. Adenovirus vectors in hematopoietic stem cell genome editing. FEBS Lett. 2019 Dec;593(24):3623-3648. doi: 10.1002/1873-3468.13668. [PMID: 31705806]
22. Surace E. M., Domenici L., Cortese K., Cotugno G., Di Vicino U., Venturi C., Cellerino A., Marigo V., Tacchetti C., Ballabio A., Auricchio A. Amelioration of both functional and morphological abnormalities in the retina of a mouse model of ocular albinism following AAV-mediated gene transfer. Mol Ther. 2005 Oct;12(4):652-8. [PMID: 16023414]
23. William S M Wold, Karoly Toth. Adenovirus vectors for gene therapy, vaccination and cancer gene therapy. Curr Gene Ther. 2013 Dec;13(6):421-33. doi: 10.2174/1566523213666131125095046. [PMID: 24279313]
24. https://yandex.ru/patents/doc/RU2731356C1_20200901
25. https://yandex.ru/patents/doc/RU2720614C1_20200512
26. Hui Jiang, Ya-Fang Mei. SARS-CoV-2 Spike Impairs DNA Damage Repair and Inhibits V(D)J Recombination In Vitro. Viruses. 2021 Oct 13;13(10):2056. doi: 10.3390/v13102056. [PMID: 34696485]
27. Panagiotis A Ntouros, Nikolaos I Vlachogiannis, Maria Pappa, Adrianos Nezos, Clio P Mavragani, Maria G Tektonidou, Vassilis L Souliotis, Petros P Sfikakis, Effective DNA damage response after acute but not chronic immune challenge: SARS-CoV-2 vaccine versus Systemic Lupus Erythematosus, Clin Immunol. 2021 Aug;229:108765. doi: 10.1016/j.clim.2021.108765. Epub 2021 Jun 2. [PMID: 34089859]
28. Panagiotis A Ntouros, Evrydiki Kravvariti, Nikolaos I Vlachogiannis, Maria Pappa, Ioannis P Trougakos, Evangelos Terpos, Maria G Tektonidou, Vassilis L Souliotis, Petros P Sfikakis. Oxidative stress and endogenous DNA damage in blood mononuclear cells may predict anti-SARS-CoV-2 antibody titers after vaccination in older adults. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2022 Jun 1;1868(6):166393. doi: 10.1016/j.bbadis.2022.166393. Epub 2022 Mar 18. [PMID: 35314351]
29. Yafang Shang, Fei-Long Meng. Repair of programmed DNA lesions in antibody class switch recombination: common and unique features. Genome Instab Dis. 2021;2(2):115-125. doi: 10.1007/s42764-021-00035-0. [PMID: 33817557]
30. Rob C Hoeben, Taco G Uil. Adenovirus DNA replication. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2013 Mar 1;5(3):a013003. doi: 10.1101/cshperspect.a013003. [PMID: 23388625]
31. Malgorzata Kloc, Ahmed Uosef, Jacek Z Kubiak, Rafik M Ghobrial. Exaptation of Retroviral Syncytin for Development of Syncytialized Placenta, Its Limited Homology to the SARS-CoV-2 Spike Protein and Arguments against Disturbing Narrative in the Context of COVID-19 Vaccination. Biology (Basel). 2021 Mar 19;10(3):238. doi: 10.3390/biology10030238. [PMID: 33808658]
32. Anya Lara Arthurs, Tanja Jankovic-Karasoulos, Claire Trelford Roberts. COVID-19 in pregnancy: What we know .from the first year of the pandemic. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2021 Dec 1;1867(12):166248. [PMID: 34461257]
33. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32650948/
34. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33108833/
35. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33555444/
36. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33134901/
37. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33080435/
38. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32563676/
39. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33150723/
40. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33294423/
41. Darrell O Ricke. Two Different Antibody-Dependent Enhancement (ADE) Risks for SARS-CoV-2 Antibodies. Front Immunol. 2021 Feb 24;12:640093. doi: 10.3389/fimmu.2021.640093. eCollection 2021. [PMID: 33717193]