Экдизон-контролируемая экспрессия трансгенов

Почему они не съедобные?
Экдизон-контролируемая экспрессия трансгенов.
Не ешь сверчков, Гертруда, это не красит дам…

Экдизон-контролируемая экспрессия трансгенов или почему съедобные насекомые и личинки не съедобные. Как писал Маяковский «если звезды зажигают, значит это кому-нибудь нужно». Остается выяснить кому и зачем нужно убедить весь мир в том, что употреблять в пищу сверчков, червей, личинок, слизняков и прочую мерзость это хорошо и полезно для человека.
Прежде чем перейти к научной части разбора, хочется привести цитату из фантастического рассказа Юлии Вознесенской о последних временах, мировом правительстве и пришествии антихриста «Паломничество Ланселота»:
«- Во-первых, я предложил ему новую продовольственную концепцию: если продовольствия не хватает для удовлетворения запросов потребителей, следует в первую очередь заняться сокращением числа потребителей с помощью имеющихся ресурсов продовольствия: это и дешевле, и эффективнее.
- Не понял?
- В стандартные продукты питания можно добавлять средство для эвтаназии, направляя их затем в те районы, которым грозит голод.
- Остроумно! А ещё что?
- Затем я предложил господину министру послать продовольственные отряды клонов в районы нашествия саранчи для сбора и обработки акрид.
- Сбора чего?
- Акрид. Акриды — это новый вид питания, разработанный под моим личным руководством в одной из лабораторий Института питания Мировой академии наук. Это съедобные животные, точнее крупные насекомые вида Gryllus migratarius. «Акриды» - древнее название, но можно предложить и другое, более современное и понятное широкому потребителю, а именно - «сухопутные креветки»» …
«- эти самые акриды использовались в пищу населением ближневосточных стран ещё в глубокой древности. Между прочим, христианские отшельники в пустыне, в том числе и знаменитый Иоанн Креститель, питались исключительно акридами и диким мёдом.
- Святые лопали саранчу? Забавно! - Мессия улыбнулся, а министры захихикали: напряжение и страх постепенно оставляли их, и они заметно успокаивались».
Заместитель директора департамента Министерства здравоохранения РФ г. Москвы, Н.Д. Пакскина, отвечая на вопрос, является ли "Спутник V" препаратом для генной терапии, в своем развернутом ответе сообщила следующее:
«Принцип создания генно-инженерных вакцин заключается в том, что в геном живых аттенуированных вирусов, бактерий, дрожжей или клеток эукариотов встраивается ген, кодирующий образование протективного антигена того возбудителя, против которого будет направлена вакцина» …
Немного пояснений. Согласно определению из словарей: «АТТЕНУАЦИЯ — (от лат. attenuatio — уменьшение), искусственное стойкое ослабление и изменение патогенности и вирулентности возбудителей инфекционных болезней. Аттенуированный вирус значит полученный в результате аттенуации. Аттенуированный вирус, репродуцируясь в клетках, не разрушает их, а приобретает селективное преимущество и вытесняет из популяции болезнетворный вирус». Последняя фраза, на мой взгляд, это лишь гипотеза, которая пока преподносится как желаемое за действительное.
Также довольно странным кажется словосочетание «протективный антиген», хотя оно довольно широко используется, например, в Методических рекомендациях по выявлению, расследованию и профилактике побочных проявлений после иммунизации" (утв. Минздравом России 12.04.2019).
По определению, Антиген — это вещество, которое организм рассматривает как чужеродное и даёт на него иммунный ответ, имеющий целью удалить это вещество.
Поэтому, на мой взгляд, понятие «протективные или защитные антигены» звучит как ошибка перевода. Тем не менее под этим словосочетанием понимаются антигены главного действия, выработанные на них антитела защищают организм от соответствующего патогена.
Далее Пакскина поясняет, что же такое генная терапия:
«В свою очередь, генная терапия - медицинское вмешательство, основанное на модификации генетического материала живых клеток. Подразумевается внедрение генетического материала напрямую путем инфузии; при этом в организм человека вводят раствор, содержащий определенное количество нужных генов, как правило, заключенных в носители (или векторы). После этого введенные генетические конструкции достигают клеток-мишеней и, попадая в них, экспрессируются там в соответствующие белковые продукты. Аденоассоциированные вирусные векторы (AAV) являются многообещающими инструментами для переноса терапевтических генов. Они обладают основными преимуществами по сравнению с другими вирусными векторами, такими как интеграция в геном хозяина, их неспособность к репликации, низкая иммуногенность, широкий клеточный тропизм и длительная экспрессия терапевтического трансгена» …
Обращаю внимание, что генная терапия включает в себя геномное редактирование, но не ограничивается им. Генная терапия это более широкий спектр видов вмешательства в работу генома. Генная терапия может быть интегративна и не интегративная. Воздействие на эпигенетическое регулирование или на экспрессию генов это тоже генная терапия.
В своем ответе Пакскина указывает, что аденовирусные векторы осуществляют интегративное вмешательство, т.е. трансген всё-таки встраивается в геном человека? Также не маловажное сообщение о том, что экспрессия чужеродных генов, т.е. продуцирование чужеродных белков, в организме человека будет длительная.
По поводу неспособности к репликации здесь стоит уточнить, что неспособность эта достигается за счет делеций в определенных генах аденовируса, ассоциированных с репликацией. И есть данные, указывающие на то, что даже такие усеченные ГМО-аденовирусы потенциально могут размножаться в раковых клетках человека [1 - 5].
С низкой иммуногенностью тоже можно поспорить [6,7], хотя ученые активно пытались решить эту проблему. Аденовирусные векторы широко изучаются в экспериментальных и клинических моделях в качестве агентов для генной терапии. Они активируют врожденный иммунный ответ вскоре после введения in vivo. В отличие от адаптивного ответа, врожденный ответ на аденовирусные векторы не зависит от транскрипции и вызывается вирусной частицей или капсидом. Этот ответ приводит к воспалению трансдуцированных тканей и значительной потере векторных геномов в первые 24 часа. Различные цитокины, хемокины и молекулы адгезии лейкоцитов индуцируются аденовирусной частицей в широком диапазоне типов клеток, обеспечивая молекулярную основу для воспалительных свойств этих векторов [7].
В своем ответе Пакскина, на мой взгляд, немного лукавит, потому что при сравнении генно-инженерных вакцин и генной терапии в описании вакцин она рассказывает о принципе их создания, а в описании генной терапии дает принцип действия таких препаратов. Принцип создания препаратов и принцип их действия это две отдельные истории, сравнивать одно с другим всё равно, что сравнивать голову с туловищем, между собой они, конечно, связаны, но это не одно и то же. Если же мы внимательно и последовательно сравним сначала принцип создания генно-инженерных вакцин и препаратов для генной терапии, а затем принцип действия одних и других, то мы вряд ли сможем найти отличия.
В заключении Пакскина делает вывод, что:
«Всё вышесказанное доказывает, что комбинированная векторная вакцина Гам-КОВИД-Вак не является геннотерапевтическим препаратом».
Единственным объективным отличием генно-инженерных вакцин от препаратов для генной терапии, которое приводит в своем ответе Пакскина, может служить фраза:
«Препараты генной терапии несут в себе собственные человеческие белки, векторные вакцины - вирусные белки».
Однако это весьма условное деление и опять же лукавство в классификации. Несут они, во-первых, не белки, а инструкции по биосинтезу белков, но это уточнение. Во-вторых, идея генной терапии возникла в попытке решить проблемы моногенных заболеваний. Это ситуации, когда мутация в одном гене приводит к выключению гена или биосинтезу усеченного или неактивного соответствующего белка, что выражается как генетическое заболевание, тогда как восполнение недостающего или дефицитного белка оказывает терапевтический эффект на такого больного. Поэтому Пакскина и говорит о собственных человеческих белках. И в этом случае слово «терапия» оправдано. Тогда как в случае вирусных белков я бы лучше использовала слово «геноцид», но Минздрав называет такие препараты рекомбинантными или генно-инженерными вакцинами.
Подводя итоги, получаем, что и препараты для генной терапии и генно-инженерные вакцины имеют идентичный принцип создания (генно-модифицированный аденовирусный или аденоассоциированный вирусный вектор, несущий на себе трансген, т.е. ген отличный от генов генома реципиента), идентичный принцип действия (трансген экспрессирует, т.е. происходит биосинтез белков по инструкциям этого гена, в клетках человека), однако имеют разные цели.
Возвращаясь к определению антигена, не сложно предположить, что иммунная система будет просто обязана атаковать клетки собственного организма, продуцирующие антиген, а такое поведение приведет к аутоиммунным проблемам. Такой принцип действия геннотерапевтических препаратов хорошо известен и использовался для разработки терапевтических подходов для лечения онкобольных [1,3].
Так, например, в октябре 2021 г. Минздрав РФ выдал ООО «Генная хирургия» разрешение на проведение I фазы клинических исследований (КИ) препарата АнтионкоРАН-М, предназначенного для генной терапии злокачественных солидных опухолей с невирусной системой доставки. Доклинические исследования препарата начались в 2010 году. В основе АнтионкоРАН-М лежит метод доставки так называемого гена – убийцы рака и гена, который активирует противоопухолевый иммунный ответ, - сообщают Новости Сколково [8].
В целом, что такое геннотерапевтические препараты должно быть описано в документе: "ОФС.1.9.1.0001.18. Общая фармакопейная статья. Генотерапевтические лекарственные препараты" (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749) ("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II"), который, правда, отсутствует в свободном доступе [9].
В декабре 2021 г. Минздрав РФ зарегистрировал препарат «Золгенсма». Действующее вещество онасемноген абепарвовек представляет собой не реплицирующийся рекомбинантный аденоассоциированный вирусный (AAV) вектор, который использует каспид аденоассоциированного вируса серотипа 9 для доставки стабильного, полностью функционального трансгена человеческого SMN. Предназначен препарат для введения функциональной копии гена выживания моторных нейронов 1 (SNM1) в трансдуцированные клетки для устранения моногенной первопричины спинальной мышечной атрофии. Ожидается, что он будет стабильно экспрессироваться на протяжении длительного времени [10].
Принцип создания и принцип действия этих препаратов аналогичен принципу создания и принципу действия генноинженерных вакцин, разница только в трансгене.
Для Спутника V, по крайней мере в свободном доступе, отсутствуют данные по фармакокинетике, такие как распределение и выделение.
Но такие данные описаны в инструкции к Золгенсма: «Оценка биораспределения была проведена у двух пациентов, которые умерли через 5,7 и 1,7 месяцев соответственно после инфузии препарата. В обоих случаях максимальное содержание векторной ДНК было обнаружено в печени. Векторная ДНК была также обнаружена в селезенке, сердце, поджелудочной железе, паховых лимфатических узлах, скелетных мышцах, периферических нейронах, почках, легких, кишечнике, гонадах, спинном мозге, головном мозге и тимусе…
Временное выделение онасемноген абепарвовека происходит, главным образом, с продуктами жизнедеятельности. Лицам, осуществляющим уход, и семьям пациентов следует соблюдать инструкции по правильному обращению с испражнениями пациентов».
Эти данные не дают 100% гарантии того, что со «Спутником» будет всё также, но их следует учесть, размышляя над вопросом, могут ли вакцинированные оказывать какое-либо воздействие на не вакцинированных.
Кстати говоря, зарубежные исследователи и разработчики не пытаются дурить голову на счет мРНК и векторных вакцин, смело заявляя, что использовали генную терапию для создания своих иммунопрофилактических препаратов, в том числе и CRISPR системы [11 - 14].
При чем же тут съедобные насекомые?
Дело в том, что внести трансген в живой организм это одна задача, а вот заставить его экспрессировать, т.е. запустить биосинтез белков по инструкциям этого трансгена – другая. Ещё больший интерес представляет возможность включения/выключения или переключения таких трансгенов.
Подобные разработки были опубликованы более 20 лет назад (1997 – 2002 гг). С целью воздействия на экспрессию трансгенов были предложены следующие системы:
- Экдизон-индуцируемая система,
- Тетрациклин-регулируемые системы,
- Антипрогестин-регулируемый переключатель,
- Система регуляции на основе димеров [15].
Системы индуцибельной экспрессии демонстрируют большой потенциал для использования в генной терапии человека, а системы, основанные на рецепторах экдизона насекомых, являются особенно многообещающими кандидатами. Поскольку экдистероиды обычно не встречаются у млекопитающих, а стероиды млекопитающих не активируют экдизоновые рецепторы насекомых, можно использовать генные переключатели, регулируемые экдизоном, для обеспечения быстрой и обратимой экспрессии трансгенов, введенных в клетки млекопитающих. В таких системах белок млекопитающих RXR обычно используется вместо природного лиганда экдизоновых рецепторов EcR, USP. Коэкспрессия белков EcR и RXR ведет к образованию комплекса EcR/RXR, который специфически связывается с ответными элементами, присутствующими в промоторе трансгена. Связывание рецептором EcR агониста, такого как экдистероид, вызывает конформационные изменения, что по итогу активирует транскрипцию и запускает экспрессию трансгенного продукта. Такие системы были протестированы in vitro на клеточных линиях и in vivo на животных моделях.
Было показано, что системы, регулируемые экдизоном, позволяют индуцировать экспрессию введенных генов у трансгенных животных. Клеточная экспрессия белков EcR у млекопитающих, по-видимому, не вызывает токсический и иммунный ответ. Трансгенные грызуны, экспрессирующие компоненты рецептора экдизона, кажутся физиологически нормальными [16].

 
 

Экдистероиды — это стероидные гормоны членистоногих, которые в основном отвечают за линьку, развитие и, в меньшей степени, размножение; примеры экдистероидов включают экдизон, экдистерон, туркестерон и 2-дезоксиэкдизон. ;-экдизон впервые выделен в 1954 из коконов шелковичного червя. Экдизоны обнаружены также в растениях - фитоэкдистероиды [17, 18].
В целом использование различных регулирующих экспрессию систем дает три варианта воздействия на экспрессию трансгенов:
- выключение экспрессии за счет введения низкомолекулярного соединения, образующего неактивный комплекс с ДНК-связывающим активирующим доменом (тетрациклиновые системы),
- включение экспрессии за счет введения низкомолекулярного соединения, образующего активный комплекс с ДНК-связывающим активирующим доменом (экдизон-индуцируемые системы),
- переключатели на основе димеров. Димерные или двойные молекулы одним концом связываются с ДНК-связывающим доменом, а другим с активирующим доменом и таким образом включают экспрессию трансгена. Введение аналогичных мономерных молекул разрывают эту цепь и выключают экспрессию [19].

 
Также были опубликованы работы, демонстрирующие успешное объединение аденовирусных векторов и систем регуляции экспрессии трансгенов in vitro и in vivo.
Для определения оптимальной системы регуляции экспрессии трансгенов из аденовирусных векторов было проведено сравнение различных систем (на основе тетрациклина, экдизона, антипрогестина и димеров), индуцирующих экспрессию, в трех клеточных линиях с использованием репортерного гена люциферазы [20].
In vivo эксперименты были проведены на мышах, на аденовирусном векторе был внесен ген гормона роста человека (hGH), экспрессию определяли в гепатоцитах. В качестве индуктора использовали Мифепристон — синтетическое стероидное антипрогестагенное лекарственное средство, не обладающее гестагенной активностью, которое обычно используется для прерывания нежелательной беременности, а также при неразвивающейся беременности на ранних сроках без хирургического вмешательства [21].
Таким образом, получается, что в настоящее время существует технологии, которые позволяют вводить в организм млекопитающих трансгены, в том числе используя для этого и аденовирусные векторы, а экспрессию внесенных трансгенов регулировать с помощью фармсубстанций или экдизонов, которыми богаты членистоногие, которых начинают активно рекламировать, как продукты питания для людей, предварительно навязав всему миру новые иммунопрофилактические препараты, чаще мРНК или векторные вакцины, несущие на себе инструкции по созданию S-белка вируса SARS-CoV-2.
Представленный обзор, конечно же, не является прямым доказательством теории заговора, но демонстрирует потенциальные технологические возможности, а также подобно собранному пазлу наводит на определенные соображения, выводы из которых каждый волен делать самостоятельно.

Однако экдизон-контролируемая экспрессия трансгенов это не единственная причина, вызывающая опасения, связанные с перспективой употребления членистоногих в пищу человеком.
С 1 января 2018 г. вступил в силу Регламент (ЕС) 2015/2238 Европейского парламента и Совета от 25 ноября 2015 г., вводящий понятие «новых пищевых продуктов», включая насекомых и их части. Одними из наиболее часто используемых видов насекомых являются: мучные черви (Tenebrio molitor), домашние сверчки (Acheta domesticus), тараканы (Blattodea) и перелетная саранча (Locusta migrans).
Сотрудники кафедры ветеринарной профилактики и гигиены кормов, факультета ветеринарной медицины Варминьско-Мазурского университета в Польши в своей работе «Паразитологическая оценка съедобных насекомых и их роль в передаче паразитарных болезней человеку и животным» изучили этот вопрос и пришли к следующему заключению:
«Съедобные насекомые являются недооцененным резервуаром паразитов человека и животных. Проведенные исследования указывают на важную роль этих насекомых в эпидемиологии паразитов, патогенных для позвоночных. Это паразитологическое исследование свидетельствует о том, что съедобные насекомые могут быть важнейшим переносчиком паразитов для домашних насекомоядных животных» [22].
На животных моделях было продемонстрировано, что фитоэкдистероиды туркестерон, экдистерон и 2-дезокси-альфа-экдизон оказывают анаболическое воздействие на млекопитающих. В опытах на белых мышах установлено, что эти вещества в дозе 5 мг на 1 кг массы тела стимулируют синтез белка. На модели белкового синтеза печени мышей показано, что действие фитоэкдистероидов связано с повышением функциональной активности полирибосом и увеличением скорости образования белковых макромолекул [23]. 
Стоит отметить, что у анаболических стероидов есть много различных побочных эффектов, часть которых необратимы, среди которых: поведенческие/психиатрические нарушения, нарушения кардиоваскулярной системы, нарушения работы печени и почек, нарушение половых функций и бесплодие у женщин и у мужчин, проблемы с кожей, нарушения эндокринной системы, повышенный риск развития раковых заболеваний, хронический приём стероидов повышает в 4,6 раз риск смерти, - считает Минздрав Израиля [24].
Сообщения про сверчковую ферму в Новосибирске и призыв россиян есть жуков и слизней вместо мяса можно встретить в СМИ [25, 26].
Если следить за зарубежными тенденциями, то можно предположить, что основной упор реклама «новых пищевых продуктов» делает на детей и подростков.

Используемая литература:
1.William S M Wold, Karoly Toth. Adenovirus vectors for gene therapy, vaccination and cancer gene therapy. Curr Gene Ther. 2013 Dec;13(6):421-33. doi: 10.2174/1566523213666131125095046. [PMID: 24279313] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24279313/
2. Rob C Hoeben, Taco G Uil. Adenovirus DNA replication. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2013 Mar 1;5(3):a013003. doi: 10.1101/cshperspect.a013003. [PMID: 23388625] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23388625/
3. William S M Wold, Karoly Toth. Adenovirus vectors for gene therapy, vaccination and cancer gene therapy. Curr Gene Ther. 2013 Dec;13(6):421-33. doi: 10.2174/1566523213666131125095046. [PMID: 24279313] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24279313/
4. https://yandex.ru/patents/doc/RU2731356C1_20200901
5. https://yandex.ru/patents/doc/RU2720614C1_20200512
6. Chang Li, Andr; Lieber. Adenovirus vectors in hematopoietic stem cell genome editing. FEBS Lett. 2019 Dec;593(24):3623-3648. doi: 10.1002/1873-3468.13668. [PMID: 31705806] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31705806/
7. Surace E. M., Domenici L., Cortese K., Cotugno G., Di Vicino U., Venturi C., Cellerino A., Marigo V., Tacchetti C., Ballabio A., Auricchio A. Amelioration of both functional and morphological abnormalities in the retina of a mouse model of ocular albinism following AAV-mediated gene transfer. Mol Ther. 2005 Oct;12(4):652-8. [PMID: 16023414] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16023414/
6. Ramon Alemany. Chapter four--Design of improved oncolytic adenoviruses. Adv Cancer Res. 2012;115:93-114. doi: 10.1016/B978-0-12-398342-8.00004-5. [PMID: 23021243] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23021243/
7. Q Liu, D A Muruve. Molecular basis of the inflammatory response to adenovirus vectors. Gene Ther. 2003 Jun;10(11):935-40. doi: 10.1038/sj.gt.3302036. [PMID: 12756413] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12756413/
8. Новости Сколково: 9. Консультант плюс: 10. Инструкция Минздрав Золгенсма: 11. Hironori Nakagami. Development of COVID-19 vaccines utilizing gene therapy technology. Int Immunol. 2021 Sep 25;33(10):521-527. doi: 10.1093/intimm/dxab013. [PMID: 33772572] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33772572/
12. Omar S Abu Abed. Gene therapy avenues and COVID-19 vaccines. Genes Immun. 2021 Jun;22(2):120-124. doi: 10.1038/s41435-021-00136-6. Epub 2021 Jun 2. [PMID: 34079091] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34079091/
13. Fatemeh Safari, Mohammad Afarid, Banafsheh Rastegari, Afshin Borhani-Haghighi, Mazyar Barekati-Mowahed, Abbas Behzad-Behbahani. CRISPR systems: Novel approaches for detection and combating COVID-19. Virus Res. 2021 Mar;294:198282. doi: 10.1016/j.virusres.2020.198282. Epub 2021 Jan 8. [PMID: 33428981] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33428981/
14. Melika Lotfi, Nima Rezaei. CRISPR/Cas13: A potential therapeutic option of COVID-19. Biomed Pharmacother. 2020 Nov;131:110738. doi: 10.1016/j.biopha.2020.110738. [PMID: 33152914] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33152914/
15. D M Harvey, C T Caskey. Inducible control of gene expression: prospects for gene therapy. Curr Opin Chem Biol. 1998 Aug;2(4):512-8. doi: 10.1016/s1367-5931(98)80128-2. [PMID: 9736925] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9736925/
16. Lloyd D Graham. Ecdysone-controlled expression of transgenes. Expert Opin Biol Ther. 2002 Jun;2(5):525-35. doi: 10.1517/14712598.2.5.525. [PMID: 12079488] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12079488/
17. Krishnakumaran A, Schneiderman HA (December 1970). "Control of molting in mandibulate and chelicerate arthropods by ecdysones". The Biological Bulletin. 139 (3): 520–538. doi:10.2307/1540371. JSTOR 1540371. [PMID 5494238] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/5494238/
18. Margam VM, Gelman DB, Palli SR (June 2006). "Ecdysteroid titers and developmental expression of ecdysteroid-regulated genes during metamorphosis of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti (Diptera: Culicidae)". Journal of Insect Physiology. 52 (6): 558–568. doi:10.1016/j.jinsphys.2006.02.003. [PMID 16580015] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16580015/
19. T Clackson. Controlling mammalian gene expression with small molecules. Curr Opin Chem Biol. 1997 Aug;1(2):210-8. doi: 10.1016/s1367-5931(97)80012-9. [PMID: 9667854] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9667854/
20. Zhi-Li Xu, Hiroyuki Mizuguchi, Tadanori Mayumi, Takao Hayakawa. Regulated gene expression from adenovirus vectors: a systematic comparison of various inducible systems. Gene. 2003 May 8;309(2):145-51. doi: 10.1016/s0378-1119(03)00506-7. [PMID: 12758130] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12758130/
21. S Y Tsai, K Schillinger, X Ye. Adenovirus-mediated transfer of regulable gene expression. Curr Opin Mol Ther. 2000 Oct;2(5):515-23. [PMID: 11249754] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11249754/
22. Remigiusz Ga;;cki, Rajmund Sok;;. A parasitological evaluation of edible insects and their role in the transmission of parasitic diseases to humans and animals. PLoS One. 2019 Jul 8;14(7):e0219303. doi: 10.1371/journal.pone.0219303. eCollection 2019. [PMID: 31283777] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31283777/
23. V N Syrov. Mechanism of the anabolic action of phytoecdisteroids in mammals. Nauchnye Doki Vyss Shkoly Biol Nauki. 1984;(11):16-20. [PMID: 6525371] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6525371/
24. Минздрав Израиля: 25. https://rg.ru/2022/06/08/znaj-svoj-shestok.html
26. https://deita.ru/article/525722