Глава 9. Бактериофаг против птичьего тифа

Наблюдения за больными с инфекционными кишечными заболеваниями дали убедительное подтверждение сделанному ранее Д’Эреллем заключению, что выздоровление непосредственно связано с бактериофагом, активным к возбудителю заболевания. Значит, выздоровление можно вызвать искусственно, вводя больному соответствующий бактериофаг.
 
“Но прежде чем проводить опыты выздоровления на людях, - пишет Д’Эрелль, - мне надо было его опробовать на животных”. И случай представился. Весной 1919 г. его друг Е.Вульгейн – химик в институте Пастера, рассказал Д’Эреллю, что на предыдущей неделе, когда он был у родителей в деревне в провинции Арсиз-сур-Аубе в местечке Роуж, там свирепствовала болезнь домашней птицы с высокой смертностью.  Д’Эрелль поспешил туда. Болезнь оказалась крайне заразной. Любая пораженная курица умирала менее чем за 48 часов. Животное переставало принимать пищу, оставалось неподвижным, лежало с закрытыми глазами и взъерошенными перьями. Все это сопровождалось обильным поносом. Но были и молниеносные формы, когда курицы умирали менее чем за 2 часа, свернувшись в клубок, без поноса. Д’Эрелль обследовал в лаборатории несколько трупов и идентифицировал Salmonella gallinarum, возбудитель болезни домашней птицы, очень распространенной в США под названием “брюшной тиф домашней птицы”.  Д’Эрелль связался с ветеринарной службой, на что ему ответили, что уже два года во Франции наблюдают случаи “холеры куриц”, позднее они признали свою диагностическую ошибку, это все же был “тиф”, и Д’Эрелль назвал эту болезнь “птичий тиф”.

В 1919 г. эпидемия птичьего тифа охватила всю Францию. Начало ее всегда было неожиданным. В течение 3-4 месяцев погибала половина, а иногда и больше от всего поголовья птичьих дворов. Затем болезнь принимала спорадический характер, то затухая, то вспыхивая вновь.

“Чтобы продолжить мои исследования по выздоровлению, - вспоминает Д’Эрелль, - я пустился по следу, посещая деревню за деревней. Я осмотрел более тридцати курятников”. У всех куриц, больные они или здоровые, удавалось выявить только бактериофаг к нормальной кишечной палочке, абсолютно неактивный к S.gallinarum и никакого выздоровления не наблюдалось.

Несмотря на эти неудовлетворительные результаты, Д’Эрелль продолжал наблюдения. После более месяца бесполезных исследований один фермер пришел сообщить, что курица, больная уже два дня, начала понемногу выздоравливать. Д’Эрелль побежал к нему. Курица еще не была совсем здоровой, но уже открыла глаза и могла самостоятельно встать на ноги, она шла пошатываясь. Д’Эрелль огородил эту курицу частоколом, чтобы собрать ее помет, а затем отпустил на свободу. Исследование испражнений показало, что колифаг стал очень активен и к сальмонелле. Д’Эрелль пишет: “Механизм выздоровления от птичьего тифа был, следовательно, идентичен механизму выздоровления от других человеческих желудочно-кишечных заболеваний, которые я изучал до сих пор”.
 
Выздоровевшая курица, которую, как пишет Д’Эрелль, “я отпустил не без намерения на свободу”, предотвратила распространение болезни в этом курятнике. “Заболела еще лишь одна курица, и она вылечилась, и падеж куриц прекратился внезапно и окончательно”.

Птичий тиф настолько тяжелая болезнь, что Д’Эреллю удалось наблюдать только 4 случая выздоровления. У всех выживших куриц в испражнениях выявлялся бактериофаг к возбудителю болезни. При исследовании более 100 куриц, погибших от птичьего тифа, ни разу не был найден бактериофаг, активный к возбудителю болезни, тем не менее, бактериофаг всегда присутствовал в кишечнике куриц. Это был бактериофаг, вирулентный к штаммам бактерий из группы тифа, дизентерии и кишечной палочки, однако он был не активен для патогенных в данном случае микробов.

Д’Эрелль отмечает, что “при птичьем тифе, также как и при тифе и дизентерии человека необходимым условием для выздоровления является приспособление вирулентности кишечного бактериофага к возбудителю болезни”. На примере птичьего тифа ему удалось изучить влияние бактериофага не только на саму болезнь, но и на весь ход эпидемии.

Из помета первой выздоровевшей курицы Д’Эрелль приготовил бактериофаг. Для этого несколько капель ее испражнений он добавил в питательный бульон и профильтровал через свечу Шамберлена. Добавил этот фильтрат к растущей культуре сальмонеллы и после 12 часов инкубации наблюдал полное растворение микробов. Так он получил очень активный фаголизат, который фильтровал через фарфоровую свечу и разливал в ампулы по 5 мл. В лаборатории было получено большое количество бактериофага, который хранился несколько лет.

Изолируя испражнения всех выздоравливающих куриц, которых удалось наблюдать,  Д’Эрелль собрал коллекцию разных бактериофагов и смог отобрать наиболее активные.

Для воспроизведения экспериментального выздоровления достаточно бактериофаг с высокой активностью к возбудителю болезни ввести больной курице с тем, чтобы, как пишет Д’Эрелль, “бактериофагия (разрушение бактерий) in vivo произошла также, как она проходит в пробирке, и курица должна будет вылечиться”.
Был поставлен опыт в Париже, вне зоны заражения. Было взято шесть куриц из незараженных областей. Их испражнения исследовались ежедневно в течение 10 дней, чтобы убедиться в отсутствии бактериофага к используемому в опытах штамму птичьего тифа:
1) первой курице вводили через рот 1 мл бактериофага, высоковирулентного к испытуемому штамму;
2) второй курице вводили такой же бактериофаг, но под кожу в количестве 0.5 мл.
 
Через сутки у обеих куриц в экскрементах обнаружился высоковирулентный фаг к культуре птичьего тифа. После этого первая курица ежедневно получала в течение 25 дней по 2 мл бульонной культуры испытуемого штамма. Бактериофаг в испражнениях оставался активным спустя 9 дней после последнего введения культуры возбудителя болезни. У второй курицы, которая кроме бактериофага ничего не получала, бактериофаг в испражнениях исчез уже через три дня. Таким образом, первая курица, постоянно получавшая патогенные микробы, выделяла фаг 34 дня, а вторая – только 3 дня.
 
Затем третью и четвертую курицу посадили к первой курице. Они пили и ели из одной посуды, как в общем курятнике. Спустя два дня у третьей курицы, а через 3 дня у четвертой курицы стал выходить высоковирулентный бактериофаг. С этого момента обе курицы (3-я и 4-я) выдерживали ежедневное введение испытуемой культуры по 2 мл в течение 21 дня. Таким образом, третья и четвертая курицы заразились бактериофагом при совместном проживании с первой курицей, что позволило им оставаться здоровыми даже тогда, когда им стали вводить патогенную культуру.
 
Пятая и шестая курицы служили контролем. Им ввели однократно по 2 мл бульонной культуры (с пищей). Через три дня такого кормления у них начался катар кишечника, и появились все симптомы болезни птичьего тифа и через 2-3 дня они погибли.
 
Спустя месяц после того, как у первых четырех куриц уже не выявлялся бактериофаг к испытуемой культуре, каждая из них в течение 3-х дней получала по 2 мл испытуемой культуры. У всех четырех куриц бактериофаг снова стал высокоактивным к культуре птичьего тифа и ни у одной из куриц не было признаков заболевания.
Во всех случаях инфекция производилась культурами птичьего тифа, выделенными непосредственно из крови куриц, умерших от птичьего тифа.

Таким образом, при получении смертельных доз патогенного штамма птичьего тифа живыми остались лишь те курицы, которые предварительно получали высоковирулентный бактериофаг через рот, впрыскиванием под кожу или путем заражения от курицы, выделяющей такой бактериофаг.

От лабораторных опытов Д’Эрелль перешел к полевым испытаниям. Курицам впрыскивали под кожу всегда одинаковое количество бактериофага – 0.5 мл.
Опыт №1 был проведен в местечке Абен на двенадцати птичьих дворах. В первых 10 дворах сразу после введения бактериофага больные курицы выздоровели, и эпидемия прекратилась. В одиннадцатом и двенадцатом дворах, находящихся по соседству, несмотря на введение бактериофага, эпидемия продолжалась. Анализ показал, что у них был не птичий тиф, а паратиф. После введения курицам одиннадцатого двора смеси из четырех бактериофагов, включающих и паратифозный бактериофаг, а курицам двенадцатого двора одного лишь паратифозного бактериофага, эпидемии сразу прекратились.

Было проведено еще пять опытов в разных районах Франции. И везде применение бактериофага сразу же останавливало эпидемию птичьего тифа. В опыте №6, проведенном в Ангумме, где уже шесть месяцев царил птичий тиф, и ежедневно умирало по 2-3 курицы, 50 курицам дали по 1 мл бактериофага с хлебом. После этого в течение 7 месяцев не было ни одного случая заболевания. Опыт был повторен 15 октября со 100 курицами в соседнем хозяйстве. Болезнь сразу исчезла. В хозяйствах, где бактериофаг не применяли, болезнь продолжала свирепствовать.

Д’Эрелль высказал пожелание - для лечебных целей применять смесь бактериофагов против самых разнообразных заболеваний птиц, включая и куриную холеру. Этим исследованиям  Д’Эрелль посвятил отдельную статью и подробно описал их в своей первой монографии (1921 г.) во второй части (глава 1 и 3).

Вспоминая эти исследования, Д’Эрелль пишет: “Опыты были убедительны, они коснулись сотен больных куриц, которые вылечились, проглатывая несколько капель бактериофага. В десятках курятников, где свирепствовала болезнь, я помещал пиалы, содержащие бактериофаг, который они потребляли, как напиток. Во всех случаях падеж куриц прекращался…. У меня было, следовательно, абсолютное доказательство, что выздоровление и погашение эпидемии полностью зависят от поведения бактериофага, и у меня был общий метод, позволяющий мне экспериментально воспроизвести эти два явления”.