Генная терапия новая эра или катастрофа?

Генная терапия – новая эра или катастрофический провал в области медицины?

Если обязательное медицинское страхование и коммерциализация медицинских услуг – основные инструменты для развала медицины, потому что «всё, что поставлено на деньги – ложь», а «деньги — это религия сатаны», то такое явление как генная терапия, во всяком случае в том виде, в котором она существует сейчас, на мой взгляд, – необратимый ущерб для здоровья и инструмент уничтожения человечества.

Краткая историческая справка

Считается, что идея генной терапии возникла примерно в 1960 – 1970-х гг.
В 1972 г. было обнаружено, что фрагмент ДНК от одной кишечной палочки может напрямую переносится на ДНК другой кишечной палочки.
В 1976 г. вирусы были предложены в качестве транспортеров для переноса трансгенов.
И в 1990 г была предпринята попытка лечения синдрома комбинированного иммунодефицита (СКИД) с помощью генной терапии. Лимфоциты пациента были модифицированные геном аденозиндезаминазы и введены обратно больному. Попытка оказалась успешной и положила начало этой медицинской стратегии. В период с 1990 по 1999 гг. в США было проведено более 400 клинических исследований по генной терапии с участием более 4000 пациентов. В 1999 г. была зафиксирована первая внезапная смерть одного из этих пациентов [1].
На 2016 г. по миру было проведено 2210 клинических испытаний в области генной терапии, 64% этих испытаний были посвящены лечению злокачественных новообразований, остальные – сердечно-сосудистым, моногенным, инфекционным, неврологическим, глазным, воспалительным и прочим заболеваниям. Здоровые добровольцы приняли участия в 53 таких клинических испытаниях и 50 испытаний было проведено с целью маркирования генов.
Среди генов, используемых в таких клинических испытаниях были гены антигенов, цитокинов, рецепторов, факторов иммунодефицита, факторов роста, ингибиторов репликации, маркеров, неизвестные и «суицидные» гены [1].

Определение генной терапии и геномного редактирования

С геномным редактирование в настоящее время чаще ассоциирована технология CRISPR/Cas9, так называемые «молекулярные ножницы», т.е. предполагается работа непосредственно с последовательностью ДНК, внесение конкретных изменений с использованием методов генной инженерии.
Методы генной инженерии также применяются и для создания препаратов для генной терапии.
«Генная терапия — это лечение наследственных, мультифакториальных и ненаследственных (инфекционных, злокачественных и др.) заболеваний путем введения генов в соматические клетки пациентов с целью направленного изменения генных дефектов или придания клеткам новых свойств», - такое определение в 2016 г. было опубликовано в Журнале им. П.А. Герцена, Онкология [1].

Основные принципы этого метода

К основным принципам метода генной терапии относятся:
1. Геномное редактирование:
1.1. «Молекулярные ножницы» - система CRISPR/Cas9;
1.2. Использование различных транспортеров для интегративного введения трансгенов;
1.3. мРНК платформы с последующей обратной транскрипцией;
2. Другие способы вмешательства в работу генома:
2.1. Неинтегративное введение трансгенов;
2.2. мРНК без обратной транскрипции;
2.3. Эпигенетическое регулирование;
2.4. Активация, выключение или переключение генов или трансгенов.

Фундаментальная ошибка метода

Генетический аппарат человека состоит из ядерной и митохондриальной ДНК. ДНК в ядре клетки разделена и упакована в хромосомы, у здорового человека их всегда 46, у других биологических видов это другие точно установленные значения. ДНК состоит из кодирующих и не кодирующих областей. Участок содержащий набор экзонов и интронов, с которого кодируется матричная РНК, по инструкции которой синтезируется какой-то определенный белок, называется геном.
Изначально интронные, не кодирующие области были названы «Мусорной ДНК».
Позднее были открыты теломеры, альтернативный сплайсинг, эпигенетическое регулирование и много другое, что указывает на то, что геном не так прост, как думали ученый после первых успехов по расшифровыванию генома. А именно те «успехи» навели тогда на мысль о геномном редактировании и генной терапии. Цитирую: «Простота ДНК кода соблазнила исследователей и клиницистов 1960-х гг. терапевтическим потенциалом корректировки генов».
В основу поистине высокотехнологических препаратов и современных подходов к генной терапии и геномному редактированию легло чудовищное заблуждение о якобы простоте ДНК кода.
Это заблуждение привело к ошибочному, на мой взгляд, представлению о якобы моногенных заболеваниях.
Как можно говорить о моногенных заболеваниях, если, с одной стороны, известно о полифункциональности отдельно взятых генов, а, с другой стороны, о кодировании не жизненно важных признаков сразу несколькими генами? Так, например, цвет волос кодирует порядка 20 генов. И каждый из этих генов отвечает за ряд других признаков и особенностей.

Определение мутации и геномной нестабильности

Под мутациями понимают стойкое изменение генома, те генетические и как следствие фенотипические изменения, которые передаются по наследству. Поскольку никому не известен первозданный код человека, генетики всё чаще используют понятие генные варианты. Генные варианты могут быть патогенными, нейтральными, защитными, компенсирующими, и патогенными и защитными одновременно. Глубокие интронные мутации могут влиять на экспрессию генов или изменения в одном гене может влиять на промоутер другого, генные изменения, возникающие парно, но находящиеся при этом в разных хромосомах, и многое другое - это всё указывает на то, что геном представляет собой нечто цельное, осмысленное и нераздельное, как, например, осмысленный текст или программный код.
Высокая частота мытаций, вызванная частыми внешними ущербами ДНК, ведет к геномной нестабильности, к состоянию, когда нарушаются процессы репарации ДНК, т.е. механизмы само регенерации не справляются.
Как вы думаете, если периодически вносить в геном чужеродные гены, это будет влиять на стабильность генома?
А если в единый цельный и осмысленный код компьютерной программки вносить случайные операторы, возможно, даже из других языков программирования, или удалять/заменять имеющиеся, такая программка будет работать адекватно?
 
Несостоятельность клинических и доклинических данных

Прежде чем переходить к лечению человека, любой препарат, как и любой метод, должен быть испытан в пробирке на клеточных линиях и затем на животных моделях. На клеточном уровне были разработаны способы транспортировки трансгенов для интегративного и не интегративного внедрения в геном, был разработан метод CRISPR/Cas9.  Это всё способы модификации генетического аппарата. И пока они не используются для лечения людей или сельскохозяйственных животных, пока это только фундаментальные исследования, вопросов к ним практически нет.
Какие исследования проводились на животных моделях и какой в них подвох?
Разберу только два типичных примера.

1. CRISPR/Cas9 для лечения бокового амиотрофического склероза [2].
Было установлено, что мутации гена SOD1 связаны примерно с 20% случаев этого заболевания, которые наблюдались как семейные и наследственные. Далее были созданы трансгенные мыши, в геном которых внесли мутантный человеческий ген SOD1, разумеется с промоутером для избыточной экспрессии. Ничего не напоминает? И на таких мышиных моделях было показано, что у трансгенных животных ожидаемо развивается соответствующий фенотип, т.е. возникает заболевание очень похожее на боковой амиотрофический склероз. И что же сделали исследователи далее? Правильно! Используя инструмент редактирования, CRISPR/Cas9, они удалили внесенный ранее трансген. И что же произошло? Правильно! Мышки выздоровели! Успех? Ну, на лабораторном уровне успех. Только у этого успеха серьезная проблемка. Исследователи изначально нарушили геном здоровой мыши, вызвали у нее заболевание, а потом устранили ту самую «занозу», тот самый «спусковой крючок», тот самый «триггер», который и являлся причиной болезни, повторным геномным редактированием. Так какое же, простите, это лечение? Если человеку давать постоянно слабительное, у него будет диарея. Если слабительное отменить, диарея постепенно прекратиться. Это же очевидно. В этом эксперименте геном сначала умышленно повредили, а потом постарались вернуть его в первозданное состояние.
Кроме того, согласно заявлениям авторов, такое двойное редактирование не обошлось без последствий: «Такие побочные эффекты, как нецелевое редактирование, большие делеции ДНК и другие перестройки являются основными проблемы безопасности, которые еще предстоит адекватно решить в доклинические исследования in vivo».

2. Устранения нистагма у мышей, накаутированных по гену GPR143 [3].
Ситуация обратная предыдущему примеру. Здесь сначала получили мышат, методом ЭКО. Отредактировали эмбрионы, полностью удалив ген GPR143, мутации в котором прежде уже были ассоциированы с таким заболеванием как нистагм. Таким образом были созданы мышата с соответствующим заболеванием. И как же их лечили? Внесли в их геном родной недостающий ген на (Внимание!) аденоассоциированном вирусном транспортере! Результат – нистагм прекратился.
На мой взгляд оба варианта подобных исследований выглядят, как «кролик в шляпе». Как говорил мой преподаватель по термодинамике: «Чтобы вытащить кролика из шляпы, надо прежде его туда посадить».
Повторюсь, как лабораторные исследования, это прекрасные и трудоемкие работы. Но эти «успехи» слишком «сырые», чтобы давать им прикладное назначение.
Не были изучены отложенные побочные эффекты, до конца не ясно, все ли клетки хотя бы в пределах отдельных тканей подвергаются редактированию или только какая-то часть, что более вероятно. Как ведет себя иммунная система по отношению к отредактированным клеткам? Как влияет мозаицизм тканей на общее состояние здоровья? Какие попытки предпримет геном для самовосстановления и чем они обернутся? Передается ли такое редактирование потомству и т.д.?

Реклама генной терапии

Тем не менее генная терапия широко рекламируется, эта тема набирает обороты, создаются всевозможные информационные ресурсы, демонстрирующие пользу генетических скринингов, перинатальной диагностики, генетических паспортов и т.д.
Проводятся всевозможные форумы, семинары, конференции для врачей. Больше всего удивляет то, что на подобных мероприятиях акценты делаются на моногенных заболеваниях и специалистам предлагается делиться опытом исключительно относительно лечения отдельно взятых пациентов, не вдаваясь в теорию и обобщение.
Case report или история одной болезни, несомненно, может быть очень интересной и поучительной, и в медицинских журналах есть множество научных публикаций, написанных по истории болезни одного или нескольких пациентов. Но умышленно исключать из докладов теорию и обобщение, мне напоминает манипуляторную технику смещения ракурса внимания.
Тема генной терапии распространяется мягко и незаметно, как будто это просто новое поколение фарм. препаратов. Нигде особо не афишируется, что это новый экспериментальный подход, со своими «подводными камнями», а рекламируется как высокие технологии.

Права и обязанности живого измененного организма

Согласно Картохенскому протоколу по биобезопасности к Конвенции по биологическому разнообразию «Живой измененный организм» означает любой живой организм, обладающий новой комбинацией генетического материала, полученной благодаря использованию современной биотехнологии.
Теперь возвращаемся к определению генной терапии — это лечение … путем введения генов в соматические клетки пациентов с целью направленного изменения генных дефектов или придания клеткам новых свойств.
Выводы делайте самостоятельно.

Внедрение генной терапии под видом иммунопрофилактики

Согласно приведенному выше определению генной терапии ДНК препараты на векторной платформе, таки как, AstraZeneca и Спутник V, и препараты мРНК, такие как Pfizer и Moderna, попадают в раздел препаратов, предназначенных для генной терапии.
Почему терапия была навязана всему здоровому населению мира, тем более экспериментальная генная терапия, и какие в этом были «благие намерения» я лично понять не могу.
Также хочу отметить, что, по крайней мере, в СМИ уже обсуждалась идея перевода всех вакцин и/или иммунопрофилактических препаратов на векторные платформы и платформы мРНК. Остается вопрос кто и с какой целью это делает или планирует делать?

Риски генной терапии

Основные ожидаемые проблемы, которые могут возникнуть в результате применения генной терапии и геномного редактирования:
- нарушения в работе генома;
- влияние на экспрессию генов;
- изменения в эпигенетическом регулировании;
- геномная нестабильность;
- нарушение процессов репарации ДНК;
- мазаицизм и химеризация тканей;
- нарушения в белок-белковом взаимодействии и в молекулярных каскадах.
В следствии таких изменений в молекулярных процессах могут прогрессировать ранее запущенные паталогические процессы либо индуцироваться новые. Это могут быть различные хронические заболевания, заболевания иммунной системы, метаболомные нарушения, нарушения свертываемости крови, онкологические заболевания, редкие синдромы, бесплодие и т.д. Но самым основным и самым ожидаемым последствием, которое по сути включает в себя всё выше перечисленное, будет преждевременное старение различной степени.

Самое важное, что здесь надо запомнить, это формула: Экспериментальное введение = Экспериментальное лечение.

То есть, если вы соглашаетесь на участие в эксперименте, то вы должны понимать, что и все побочные эффекты, которые возникнут или если они возникнут, будут устраняться, если, конечно, кто-то будет этим заниматься, также экспериментальным образом, потому что это принципиально новые нарушения здоровья, с которыми ещё не приходилось сталкиваться медицине.
Если откинуть всю науку и все зачастую надуманные сложности, предлагаю вспомнить одну простую и древнюю мудрость: испокон веков считалось необходимостью хранить целомудрие. Целомудрие и целостность — это куда более широкие понятия, чем это принято понимать сейчас. Но посмотрите, что происходит: разрушение морали, разрушение семей, разрушение традиционных ценностей, пластические операции, операции по смене пола, а теперь нас хотят развратить на молекулярном уровне, на уровне нашей ДНК?
Геном должен быть неприкосновенным. Я считаю, это моё мнение, что генная терапия, это крах всей бигфармы.

Используемая литература:

1. Безбородова О.А., Немцова Е.Р., Якубовская Р.И., Каприн А.Д. Генная терапия — новое направление в медицине. Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. 2016;5(2):64;72. https://doi.org/10.17116/onkolog20165264-72.
2. Han-Xiang Deng. Efficacy and long-term safety of CRISPR/Cas9 genome editing in the SOD1-linked mouse models of ALS. Commun Biol. 2021 Mar 25;4(1):396. doi: 10.1038/s42003-021-01942-4. [PMID: 33767386], https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33767386/
3. Surace E. M., Domenici L., Cortese K., Cotugno G., Di Vicino U., Venturi C., Cellerino A., Marigo V., Tacchetti C., Ballabio A., Auricchio A. Amelioration of both functional and morphological abnormalities in the retina of a mouse model of ocular albinism following AAV-mediated gene transfer. Mol Ther. 2005 Oct;12(4):652-8. [PMID: 16023414], https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16023414/